Kit ELISA CHO-HCP
Une méthode ELISA immunosorbant en une étape est utilisée dans ce test.Les échantillons contenant CHOK1 HCP réagissent simultanément avec l'anticorps de chèvre anti-CHOK1 marqué par HRP et l'anticorps anti-CHOK1 recouverts sur la plaque ELISA, formant finalement un complexe sandwich d'anticorps en phase solide-anticorps marqué par HCP.L'antigène-anticorps non lié peut être éliminé en lavant la plaque ELISA.Le substrat TMB est ajouté au puits pour une réaction suffisante.Le développement de la couleur est arrêté après l'ajout de la solution d'arrêt, et la DO ou la valeur d'absorbance de la solution réactionnelle à 450/650 nm est lue avec un lecteur de microplaques.La valeur OD ou valeur d'absorbance est proportionnelle à la teneur en HCP dans la solution.À partir de là, la concentration de HCP dans la solution peut être calculée selon la courbe standard.
Application
Ce kit est utilisé pour détecter quantitativement la teneur en résidus protéiques de la cellule hôte CHOK1 dans les échantillons.
Ccomposants
| S/N | Composant | Concentration | Conditions de stockage |
| 1 | Norme CHOK1 HCP | 0,5mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5mg/ml | ≤–20℃, protéger de la lumière |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, protéger de la lumière |
| 4 | 20 × PBST 0,05 % | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Arrêter la solution | NA | RT |
| 6 | Scelleurs de microplaques | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Plaques de pré-revêtement à haute adsorption | NA | 2-8 ℃ |
Matériel nécessaire
| Consommables / Équipement | Fabrication | Catalogue |
| Lecteur de microplaque | Dispositifs moléculaires | Spectra Max M5, M5e ou équivalent |
| Thermomixeur | Eppendorf | Eppendorf/5355, ou équivalent |
| Mélangeur de vortex | IKA | MS3 Digital, ou équivalent |
Stockage et stabilité
1.Transport à -25~-15°C.
2.Les conditions de stockage sont telles qu'indiquées dans le tableau 1 ;les composants 1-2 sont stockés ≤–20°C, 5-6 sont stockés RT,3、4, 7, 8 sont stockés à 2-8 ℃ ;la durée de validité est de 12 mois.
Paramètres du produit
1.Sensibilité : 1ng/mL
2.Plage de détection : 3 à 100 ng/mL
3.Précision : CV intra-essai ≤ 10 %, CV inter-essai ≤ 15 %
4.Couverture HCP : > 80 %
5.Spécificité : Ce kit est universel car il réagit spécifiquement avec CHOK1 HCP indépendamment du processus de purification.
Préparation des réactifs
1.PBST 0,05%
Prendre 15 ml de 20×PBST 0,05% dilué dans du ddH2O, et complété à 300 ml.
2.1,0% de BSA
Prélever 1 g de BSA du flacon et diluer dans 100 ml de PBST 0,05 %, bien mélanger jusqu'à dissolution complète et conserver à 2-8°C.Le tampon de dilution préparé est valable 7 jours.Il est recommandé de préparer selon les besoins.
3.Solution de détection 2μg/mL
Prendre 48 μL de 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP et diluer dans 11 952 μL de BSA à 1 % pour obtenir une concentration finale de 2 μg/mL de solution de détection.
4.CQ et préparation des normes CHOK1 HCP
| Tube Non. | Original | Concentration | Volume | 1%BSA | volume total | Final |
| A | Standard | 0,5mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1 000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tableau : Préparation du CQ et des normes
Procédure de test
1.Préparez les réactifs comme indiqué dans « Préparation des réactifs » ci-dessus.
2.Prélevez 50 μL d’étalons, d’échantillons et de CQ (voir tableau 3) dans chaque puits, puis ajoutez 100 μL de solution de détection (2 μg/mL) ;Couvrir la plaque de scellant et placer la plaque ELISA sur le thermomixer.Incuber à 500 tr/min, 25 ± 3 ℃ pendant 2 heures.
3.Retournez la microplaque dans l’évier et jetez la solution de revêtement.Pipeter 300 μL de PBST 0,05 % dans chaque puits pour laver la plaque ELISA et jeter la solution, puis répéter le lavage 3 fois.Retournez l'assiette sur une serviette en papier propre et séchez-la.
4.Ajouter 100 μL de substrat TMB (voir tableau 1) dans chaque puits, sceller la plaque ELISA et incuber dans l'obscurité à 25 ± 3 ℃ pendant 15 min.
5.Pipeter 100 μL de solution d’arrêt dans chaque puits.
6.Mesurez l’absorbance à une longueur d’onde de 450/650 nm avec un lecteur de microplaques.
7.Analyser les données par SoftMax ou un logiciel équivalent.Tracez la courbe standard à l'aide d'un modèle de régression logistique à quatre paramètres.
Exemple de courbe standard
REMARQUE : Si la concentration de HCP dans l'échantillon dépasse la limite supérieure de la courbe standard, il doit être correctement dilué avec un tampon de dilution avant le test.
REMARQUES
La solution d'arrêt est de l'acide sulfurique 2M, à manipuler avec précaution pour éviter les éclaboussures !
