DNase I
La DNase I (Désoxyribonucléase I) est une endodésoxyribonucléase capable de digérer l'ADN simple ou double brin.Il reconnaît et clive les liaisons phosphodiester pour produire des monodésoxynucléotides ou des oligodésoxynucléotides simple ou double brin avec des groupes phosphate à l'extrémité 5' et un hydroxyle à l'extrémité 3'.L'activité de la DNase I dépend du Ca2+ et peut être activée par des ions métalliques divalents tels que Mn2+ et Zn2+.5 mM Ca2+ protège l’enzyme de l’hydrolyse.En présence de Mg2+, l’enzyme pourrait reconnaître et cliver de manière aléatoire n’importe quel site sur n’importe quel brin d’ADN.En présence de Mn2+, les doubles brins d'ADN peuvent être simultanément reconnus et clivés presque au même site pour former des fragments d'ADN à extrémité plate ou des fragments d'ADN à extrémité collante avec 1 à 2 nucléotides dépassant.
Propriété du produit
La DNase I du pancréas bovin a été exprimée dans un système d'expression de levure et purifiée.
Ccomposants
| Composant | Volume | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, sans RNase | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| Tampon 10×DNase I | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transport et stockage
1. Stabilité de stockage : – 15℃~-25℃ pour le stockage ;
2. Stabilité du transport : transport sous des blocs de glace ;
3. Fourni en : Tris-HCl 10 mM, CaCl 2 mM2, 50% glycérol, pH 7,6 à 25℃ .
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'enzyme qui dégradera complètement 1 µg d'ADN pBR322 en 10 minutes à 37°C.
Contrôle de qualité
RNase :5U de DNase I avec 1,6 µg d’ARN MS2 pendant 4 heures à 37 ℃ ne produit aucune dégradation, comme déterminé par électrophorèse sur gel d’agarose.
Bactérien Endotoxine:Test LAL, selon la Pharmacopée chinoise IV édition 2020, méthode de test de limite de gel, règle générale (1143).La teneur en endotoxines bactériennes doit être ≤ 10 UE/mg.
Mode d'emploi
1.Préparer la solution réactionnelle dans le tube RNase-free selon les proportions indiquées ci-dessous :
| Composant | Volume |
| ARN | X µg |
| 10 × tampon DNase I | 1 μL |
| DNase I, sans RNase (5U/μL) | 1 U par μg d'ARN |
| ddH2O | Jusqu'à 10 µL |
2,37 ℃ pendant 15 minutes ;
3. Ajoutez le tampon de terminaison pour arrêter la réaction et chauffez à 65 ℃ pendant 10 minutes pour inactiver la DNase I. L'échantillon peut être directement utilisé pour la prochaine expérience de transcription.
Remarques
1.Utilisez 1U DNase I par µg d’ARN, ou 1U DNase I pour moins de 1 µg d’ARN.
2.L'EDTA doit être ajouté à une concentration finale de 5 mM pour protéger l'ARN de la dégradation lors de l'inactivation de l'enzyme.
