Prémélange RT-qPCR multiplex en une étape
Description
Numéro de catalogue : HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix est un kit de PCR quantitative multiplex basé sur l'ARN comme modèle.Dans l'expérience, la transcription inverse et la PCR quantitative sont réalisées dans le même tube de réaction, simplifiant l'opération expérimentale et réduisant le risque de contamination.La conception unique du mélange tampon et enzymes peut être utilisée dans un système lyophilisé en une seule étape.Le kit utilise la transcriptase inverse résistante à la chaleur pour une synthèse efficace de l'ADNc du premier brin à l'aide de l'ADN polymérase Taq hotstart pour une amplification quantitative.Il contient un tampon de réaction optimisé, un mélange d'enzymes, etc., et des facteurs qui inhibent efficacement l'amplification PCR non spécifique et améliorent l'efficacité d'amplification de plusieurs réactions qPCR ont été ajoutés, permettant une amplification quantitative à fluorescence multiple tout en garantissant l'efficacité d'amplification des amorces.
Composants
| Nom |
| 1. Lyo-tampon |
| 2. Mélange Lyo-Enzyme |
| 3. Protecteur Lyo |
Conditions de transportion
R : Lyo-tampon et protecteur : -25~-15℃, la durée de conservation est de 1 an.
B : Mélange Lyo-enzyme, 2-8 ℃, la durée de conservation est de 6 mois.
Mode d'emploi
1. Système de réaction (prenez 25 μL comme exemple)
| Composants | Volume (μL) | Concentration finale |
| Lyo-tampon | 6 | 1* |
| Mélange Lyo-Enzymatique | 1 | - |
| Lyo-Protecteur | 8 | - |
| Mélange d'amorces (10 μM) | 1 | 0,1-1uM |
| Mélange de sondes (10 μM) | 0,5 | 0,05-0,5 µM |
| Modèle d'ARN | 5 | - |
| DEPC H2O | Jusqu'à 25 | - |
2. Protocole de cyclisme optimisé
1) Protocole de cyclisme standard
| Étape de réaction | Température | Temps | Faire du vélo | |
| 1 | Transcription inversée | 50°Ca | 10 minutes | 1 |
| 2 | Dénaturation initiale | 95°C | 5min | 1 |
| 3 | Réaction d'amplification | 95°C | 15 secondes | 45 cycles |
| 60°Cb | 30 secondesc |
2) Protocole de cyclisme rapide
|
| Étape de réaction | Température | Temps | Faire du vélo |
| 1 | Transcription inversée | 50°Ca | 2 minutes | 1 |
| 2 | Dénaturation initiale | 95°C | 2 sec | 1 |
| 3 | Réaction d'amplification | 95°C | 1 seconde |
45 cycles |
| 60°Cb | 13 secondesc |
Note:
a) Inverse transcription: La température peut sélectionner 42°C ou 50°C pendant 10 à 15 minutes.
b) Réaction d'amplification: La température est ajustée en fonction de la valeur Tm des amorces conçues.
c)Fluorescence signal acquisition: Veuillez définir la procédure expérimentale en fonction des exigences dumanuel des instruments.
Informations techniques/Spécifications
| Démarrage à chaud | Démarrage à chaud intégré |
| Méthode de détection | Détection amorce-sonde |
| Méthode PCR | RT-qPCR en une étape |
| Type d'échantillon | ARN |
Remarques
1. Ce produit est uniquement destiné à la recherche.
2. Veuillez porter l'EPI nécessaire, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour garantir votre santé et votre sécurité !
