Prémélange vert SYBR RT-qPCR en une étape
Numéro de catalogue : HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix est destiné à la quantification de la fluorescence basée sur le colorant SYBR Green I.À l’aide d’amorces spécifiques à un gène, les réactions de transcription inverse et de qPCR sont réalisées dans un seul tube, éliminant ainsi le besoin d’opérations répétées d’ouverture du capuchon et de pipetage, améliorant considérablement l’efficacité du test et réduisant le risque de contamination.Pour les échantillons d'ARN, le kit utilise une transcriptase inverse résistante à la chaleur pour une synthèse efficace de l'ADNc et une ADN polymérase HotStart Taq pour une amplification quantitative.Dans le cadre du système tampon optimisé, la sensibilité du kit peut atteindre 0,1 pg pour les cibles fortement exprimées et jusqu'à 1 pg pour les cibles modérément exprimées.Le kit convient à l’amplification et à la quantification d’échantillons d’ADN.Il permet la détection et la quantification sensibles des acides nucléiques provenant de différents échantillons végétaux et animaux, de cellules et de micro-organismes.
Composants
| No | Nom | Volume | Volume |
| 1 | Tampon avancé | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Mélange d'enzymes avancé | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase libre H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Conditions de stockage
Ce produit doit être conservé à -25~-15℃ à l'abri de la lumière pendant 1 an.
Instructions
1.Configuration du système de réactiond
| Composants | Volume (μL) | Volume (μL) | Concentration finale |
| Tampon avancé | 12,5 | 25 | 1× |
| Mélange d'enzymes avancé | 1 | 2 | - |
| Amorce directe (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 µmol/L |
| Amorce inverse (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 µmol/L |
| Modèle d'ARNb | X | X | - |
| RNase libre H2Ôc | à 25 | à 50 | - |
Remarques:
1) une.TLa concentration finale de l'amorce était de 0,2 μmol/L, qui pouvait également être ajustée entre 0,1 et 1 μmol/L selon les besoins.
2)b.Le réactif est extrêmement sensible, avec un ARN total compris entre 1 pg et 1 µg, et les tests sur des échantillons humains ont montré un apport optimal de 1 pg pour 100 ng, en contrôlant une valeur globale de Ct comprise entre 15 et 30, selon le cas.
3) c.Il est recommandé d'utiliser 20 μL ou 50 μL pour garantir la validité et la reproductibilité de l'amplification du gène cible.
4)d.Veuillez vous préparer sur le banc ultra-propre et utiliser des embouts et des tubes de réaction sans résidus de nucléase ;des embouts avec cartouches filtrantes sont recommandés.Évitez la contamination croisée et la contamination par aérosol.
2.Programme de réaction
| Étape du cycle | Temp. | Temps | Cycles |
| Transcription inversée | 50℃a | 6 minutes | 1 |
| Dénaturation initiale | 95 ℃ | 5 minutes | 1 |
| Réaction d'amplification | 95 ℃ | 15 secondes | 40 |
| 60 ℃b | 30 secondes | ||
| Étape de la courbe de fusion | Paramètres par défaut des instruments | 1 | |
Remarques:
1) une.La température de transcription inverse peut être sélectionnée entre 50 et 55°C selon les besoins expérimentaux.Pour les échantillons d’ADN, le processus de transcription inverse peut être omis.
2)b.Dans des cas particuliers, la température de recuit/extension peut être ajustée en fonction de la valeur Tm de l'apprêt, 60°C est recommandé.
Remarques
1. Ce produit est uniquement destiné à la recherche.
2. Veuillez utiliser des blouses de laboratoire et des gants jetables pour votre sécurité.
