Phosphatase alcaline (ALP)

La phosphatase alcaline est dérivée d'une souche recombinante d'E. coli qui porte le gène TAB5.L'enzyme catalyse la déphosphorylation des extrémités 5' et 3' des phosphomonoesters d'ADN et d'ARN.En outre, il hydrolyse le ribose, ainsi que les désoxyribonucléosides triphosphates (NTP et dNTP).La phosphatase alcaline TAB5 agit sur les extrémités 5' saillantes, 5' en retrait et émoussées.La phosphatase peut être utilisée dans de nombreuses applications de biologie moléculaire, telles que le clonage ou le marquage des extrémités de sondes pour éliminer les extrémités phosphorylées de l'ADN ou de l'ARN.Dans les expériences de clonage, la déphosphorylation empêche l'ADN plasmidique linéarisé de s'auto-ligaturer.Il peut également dégrader les dNTP non incorporés dans les réactions PCR pour préparer une matrice pour le séquençage de l'ADN.L'enzyme est complètement et irréversiblement inactivée par chauffage à 70°C pendant 5 minutes, ce qui rend inutile l'élimination de la phosphatase avant la ligature ou le marquage final.