DNase I (sans Rnase) (5u/ul)
Numéro de catalogue : HC4007A
La DNase I (Désoxyribonucléase I) est une endodésoxyribonucléase capable de digérer l'ADN simple ou double brin.Il reconnaît et clive les liaisons phosphodiester pour produire des monodésoxynucléotides ou des oligodésoxynucléotides simple ou double brin avec des groupes phosphate à l'extrémité 5' et un hydroxyle à l'extrémité 3'.L'activité de la DNase I dépend du Ca2+et peut être activé par des ions métalliques divalents tels que Mn2+et Zn2+.5 mM Ca2+protège l'enzyme de l'hydrolyse.En présence de Mg2+, l'enzyme pourrait reconnaître et cliver de manière aléatoire n'importe quel site sur n'importe quel brin d'ADN.En présence de Mn2+, les doubles brins d'ADN peuvent être simultanément reconnus et clivés presque au même site pour former des fragments d'ADN à extrémité plate ou des fragments d'ADN à extrémité collante avec 1 à 2 nucléotides dépassant.
Composants
| Nom | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, sans RNase | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| Tampon 10×DNase I | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 ×10 mL |
Conditions de stockage
-25 ℃ ~ -15 ℃ pour le stockage ;Transport sous glace.
Instructions
1. Préparer la solution réactionnelle dans le tube RNase-free selon les proportions indiquées ci-dessous :
| Composant | Volume |
| ARN | X µg |
| 10 × tampon DNase I | 1μL |
| DNase I, sans RNase (5U/μL) | 1 U par µg d'ARN① |
| ddH2O | Jusqu'à 10 μL |
Remarque : ①Calculez le volume de DNase I qui doit être ajouté en fonction de la quantité d'ARN.
2. 37 ℃ pendant 15 minutes ;
3. Ajoutez 0,5 M d'EDTA à la concentration finale de 2,5 mM ~ 5 mM et chauffez à 65 ℃ pendant 10 minutes pour arrêter la réaction.L'échantillon peut être directement utilisé pour la réaction suivante telle que la transcription inverseexpérience.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'enzyme qui dégradera complètement 1 µg de pBR322.ADN en 10 minutes à 37℃.
Contrôle de qualité
RNase :5U de DNase I avec 1,6 µg d'ARN MS2 pendant 4 heures à 37℃ ne produit aucune dégradation cardéterminé par électrophorèse sur gel d'agarose.
Remarques
1. Veuillez préparer vous-même 0,5MEDTA.
2. Utilisez 1U DNase I par µg d’ARN.Cependant, si l’ARN est inférieur à 1 µg, veuillez utiliser 1U DNase I.
3. Veuillez placer l'enzyme sur la glace pendant le fonctionnement.
