Superstart qPCR Premix plus-UNG
Numéro de catalogue : HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG est un réactif spécialisé conçu pour les réactions qualitatives et quantitatives de PCR en temps réel utilisant une détection basée sur une sonde, développé spécifiquement pour les processus de lyophilisation.Il contient une nouvelle enzyme de démarrage à chaud Hotstart Taq plus (DG), dont l'activité enzymatique Taq est scellée à température ambiante, inhibant efficacement l'amplification non spécifique provoquée par l'hybridation non spécifique de l'amorce ou la formation de dimères d'amorce dans des conditions de basse température, améliorant ainsi la spécificité de la réaction d’amplification.Ce réactif utilise un tampon spécifique optimisé pour la qPCR et un système anti-contamination UNG/dUTP pour obtenir un démarrage à chaud rapide, améliorant considérablement l'efficacité et la sensibilité des réactions qPCR.Il peut obtenir de bonnes courbes d'étalonnage dans une large gamme de zones de quantification et effectuer une quantification avec précision, empêchant ainsi efficacement l'amplification faussement positive provoquée par des produits PCR résiduels ou une contamination par aérosol.Ce réactif est compatible avec la plupart des instruments PCR quantitatifs fluorescents de fabricants tels que Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad et Roche etc., et présente une bonne stabilité sous forme lyophilisée.
Composition du réactif
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratuit) (DG)
2. 250 mM de MgCl2
3. 4 × lyoprotecteur (facultatif)
Conditions de stockage
Stockage à long terme à -20℃ ;peut être conservé à 4 ℃ pendant 3 mois maximum.Bien mélanger avant utilisation etéviter les congélations et décongélations répétées.
Protocole de cyclisme
Procédure | Temp. | Temps | Faire du vélo |
Digestion | 50℃ | 2 minutes | 1 |
Activation de la polymérase | 95 ℃ | 1~5 minutes | 1 |
Dénaturer | 95 ℃ | 10~20 s | 40-50 |
Recuit et extension | 56 ~ 64 ℃ | 20~60 s | 40-50 |
Système de réaction liquide qPCRPréparation de la tige
Composition |
Volume de 25µL |
Volume de 50µL |
Concentration finale |
5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+gratuit) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
250 mM de MgCl2 | 0,45µL | 0,9µL | 4,5 millimètre |
4×lyoprotecteur1 | 6,25µL | 12,5µL | 1× |
25 × mélange amorce-sonde2 | 1µL | 2µL | 1× |
ADN du modèle3 | —— | —— | —— |
ddH2O | À 25µL | À 50µL | —— |
1. Une concentration finale de 0,2 μM pour les amorces donne généralement de bons résultats ;lorsque les performances de la réaction sont médiocres, ajustez la concentration de l'amorce dans la plage de 0,2 à 1 μM selon les besoins.La concentration de la sonde est généralement optimisée dans la plage de 0,1 à 0,3 μM grâce à des expériences de gradient pour trouver des combinaisons optimales.
2. Le nombre de copies des gènes cibles contenus dans différents types de modèles varie ;si nécessaire, une dilution graduelle peut être effectuée pour déterminer la quantité optimale d’ajout de modèle.
3. Ce système peut être lyophilisé ;lorsque les clients utilisent ce système sans exigences de congélation-séchage, 4 × lyoprotecteurs peuvent être ajoutés de manière sélective ; si des produits lyophilisés sont requis, lors de la validation des performances du produit au stade des réactifs liquides, il doit ajouter 4 × lyoprotecteurs pour garantir la cohérence avec les composants du système lyophilisé. et les effets.
Lorsque le système est utiliséd pour la lyophilisation, préparer le système as suivant:
Composition | 25µL Système de réaction |
5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratuit) (DG) | 5µL |
250 mM de MgCl2 | 0,45µL |
4×lyoprotecteur | 6,25µL |
25 × mélange amorce-sonde | 1µL |
ddH2O | À 18~20µL |
* Si d'autres systèmes de lyophilisation sont nécessaires, veuillez consulter séparément.
Processus de lyophilisationss
Procédure | Temp. | Temps | Condition | Pression |
Pré-congélation | 4℃ | 30 minutes | Prise |
1 guichet automatique |
-50 ℃ | 60 minutes | Refroidissement | ||
-50 ℃ | 180 minutes | Prise | ||
Séchage primaire | -30 ℃ | 60 minutes | Chauffage |
Vide ultime |
-30 ℃ | 70 minutes | Prise | ||
Séchage secondaire | 25 ℃ | 60 minutes | Chauffage |
Vide ultime |
25 ℃ | 300 minutes | Prise |
2. Le processus de lyophilisation ci-dessus est uniquement à titre de référence.Différents types de produits et différents lyophilisateurs ont des paramètres différents, de sorte que des ajustements peuvent être effectués en fonction des besoins réels.conditions d'utilisation.
3. Différents processus de lyophilisation peuvent convenir à différentes tailles de lots de produits lyophilisés.produits, une validation de tests suffisante doit donc être effectuée lorsqu’elle est utilisée pour une production à grande échelle.
Instruction d'utilisation de lyophiliserd poudre
1. Centrifugez brièvement la poudre lyophilisée ;
2. Ajoutez le modèle d'acide nucléique à la poudre lyophilisée et ajoutez de l'eau jusqu'à 25 µL ;
3. Bien mélanger par centrifugation et passer sur machine.
Contrôle de qualité:
1. Tests fonctionnels : sensibilité, spécificité, reproductibilité de la qPCR.
2. Aucune activité nucléase exogène, aucune contamination endo/exonucléase exogène.
Informations techniques:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG utilise une nouvelle enzyme de démarrage à chaud qui permet un démarrage à chaud rapide en 1 à 5 minutes ;Grâce à une formulation tampon spéciale, il convient aux réactions PCR quantitatives fluorescentes multiplex.
2. Il a une spécificité plus élevée qui améliore considérablement la sensibilité de la détection quantitative de la limite de PCR par fluorescence, ce qui permet de normaliser les courbes d'amplification, la valeur de fluorescence obtient une amélioration évidente sur des modèles à faible concentration, adaptés comme réactifs de détection PCR quantitative de fluorescence à haute sensibilité.
3. Pour les amorces avec une température de recuit inférieure ou des fragments de plus de 200 pb, une méthode en 3 étapes est recommandée.
4. L'efficacité d'utilisation du dUTP et la sensibilité à l'enzyme UNG diffèrent selon les gènes cibles. Ainsi, si l'utilisation du système UNG entraîne une diminution de la sensibilité de détection, le système de réaction doit être ajusté et optimisé.Si une assistance technique est requise, veuillez contacter notre société.
5. Utilisez des zones et des pipettes dédiées avant et après l'amplification, portez des gants pendant le fonctionnement et remplacez-les fréquemment ;n'ouvrez pas le tube de réaction une fois la PCR terminée afin de minimiser la contamination des échantillons par les produits de PCR.