Transcriptase inverse M-MLV
La transcriptase inverse RevScript est obtenue par la technologie du génie génétique.Il a une capacité de synthèse d'ADNc, une stabilité thermique et une limite de température de réaction plus élevées (jusqu'à 60°C).Le produit d'ADNc synthétisé mesure jusqu'à 10 kb.Il améliore l'affinité des matrices et convient à la transcription inverse de matrices d'ARN présentant une structure secondaire complexe ou des gènes à faible nombre de copies.
Composants
| Composant | HC2003B-01 (10 000 U) | HC2003B-02 (5*10 000U) | HC2003B-03 (200 000 U) |
| Transcriptase inverse RevScript (200U/μL) | 50 μL | 5×50 µL | 1 ml |
| 5 × tampon RevScript | 250 μL | 1,25 ml | 5 ml |
Condition de stockage
Ce produit doit être conservé entre -25°C~-15°C pendant 2 ans.
Définition de l'unité
Une unité incorpore 1 nmol de dTTP dans un matériau insoluble dans l'acide en 10 minutes à 37°C en utilisant Oligo(dT) comme amorce.
Configuration de la réaction
1. Dénaturation de la matrice d'ARN (cette étape est facultative, la dénaturation de la matrice d'ARN aide à ouvrir les structures secondaires, ce qui améliorera le rendement de l'ADNc du premier brin.)
| Composants | Volume (µL) |
| DdH sans RNase2O | À 13 |
| Oligo(dT)18 (50 µmol/L) ou Random Primer (50 μmol/L) Ou amorces spécifiques aux gènes (2 μmol/L) | 1 |
| ou 1 | |
| ou 1 | |
| Modèle d'ARN | Xa |
Remarques:
1) a : ARN total : 1-5 ug ou ARNm : 1-500 ng
2) Incuber à 65°C pendant 5 minutes, puis transférer immédiatement sur glace pour refroidir pendant 2 minutes.Brève centrifugation pour recueillir le liquide réactionnel, ajouter la solution de réaction de transcription inverse comme indiqué dans le tableau suivant.Pipeter doucement pour mélanger.
1.Préparation du mélange réactionnel (volume 20 μL)
| Composants | Volume (µL) |
| Mélange de l'étape précédente | 13 |
| 5 × tampon | 4 |
| Mélange dNTP (10 nmol/L) | 1 |
| Transcriptase inverse (200 U/μL) | 1 |
| Inhibiteur de RNase (40 U/μL) | 1 |
1.Effectuer la réaction dans les conditions suivantes :
| Température (°C) | Temps |
| 25 °Ca | 5 minutes |
| 42 °Cb | 15-30 minutes |
| 85 °Cc | 5 minutes |
Remarques:
1) une.Une incubation à 25°C pendant 5 minutes est nécessaire uniquement pour utiliser les hexamères aléatoires.Veuillez ignorer cette étape lorsque vous utilisez Oligo (dT)18ou une amorce spécifique au gène.
2)b.La température de transcription inverse recommandée est de 42 °C. Pour les modèles présentant des structures secondaires compliquées ou une teneur élevée en GC, il est recommandé d'augmenter la température de réaction à 50-55 °C.
3) c.Chauffage à 85°C pendant 5 minutes pour inactiver la transcriptase inverse.
4) Le produit peut être directement utilisé dans des réactions PCR ou qPCR, ou conservé à -20°C pour un stockage à court terme.Il est recommandé d'aliguter les produits et de les conserver à -80°C pour une conservation longue durée.Évitez les gels-dégels fréquents.
5) Le produit convient à la RT-qPCR en une étape, il est recommandé d'ajouter 10 à 20 U de transcriptase inverse pour chaque système de réaction de 25 μL, ou d'augmenter progressivement la quantité de transcriptase inverse en fonction de la situation réelle.
Remarques
1.Veuillez garder la zone expérimentale propre ;Des gants et des masques propres doivent être portés pendant le fonctionnement.Tous les consommables utilisés dans l’expérience doivent être exempts de RNase pour éviter toute contamination par la RNase.
2.Toutes les procédures doivent être effectuées sur la glace pour éviter la dégradation de l’ARN.
3. Des échantillons d’ARN de haute qualité sont recommandés pour garantir une haute efficacité de la transcription inverse.
4. Ce produit est uniquement destiné à la recherche.
5. Veuillez utiliser des blouses de laboratoire et des gants jetables pour votre sécurité.
