UNG sensible à la température
L'UNG sensible à la température (TS-UNG) est obtenu par expression recombinante dans E. coli.L'enzyme catalyse la libération d'uracile libre à partir de l'ADN simple et double brin contenant de l'uracile et est inactive contre l'ARN.Comparée à l'enzyme UNG conventionnelle d'origine génique d'E. coli, l'enzyme TS-UNG a une activité plus élevée à basse température (20 ℃ ~ 37 ℃) et est sensible à la température et facilement inactivée (50 ℃), évitant ainsi la dégradation de l'amplification contenant du dUTP. produits à température ambiante par l'activité résiduelle qui peut subsister après inactivation de l'enzyme UNG classique.Par conséquent, l'enzyme TS-UNG convient non seulement à la réaction de prévention de la contamination par PCR, mais correspond également bien au programme d'amplification RT-PCR et peut être utilisée dans la réaction de prévention de la contamination par RT-PCR.
Application recommandée
Amplification de la prévention de la contamination
Condition de stockage
-20°C pour un stockage à long terme, doit être bien mélangé avant utilisation, éviter les cycles de congélation-dégel fréquents.
Tampon de stockage
Tris-HCl 20 mM (pH 7,5), NaCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, stabilisant, glycérol à 50 %.
Définition de l'unité
La quantité d'enzyme nécessaire pour dégrader 1 µg d'ADN simple brin contenant des bases dU en 1 heure à 37°C est de 1 unité d'activité (U).
Contrôle de qualité
1.Pureté électrophorétique SDS-PAGE supérieure à 98 %
2.Activité de dégradation, contrôle lot à lot, stabilité
3.Aucune activité nucléase exogène, aucune endonucléase exogène ou contamination par exonucléase.
Instructions
| Composants | Volume (μL) | Concentration finale |
| 10 × Tampon PCR (sans dNTP, Mg²+gratuit) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 µM |
| dUTP (remplacer dTTP) | - | 200-600 µM |
| 25 mM de MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25U |
| 1 U/µLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5U (0,1-0,5U) |
| 25 × mélange d'apprêtun | 2 | 1× |
| Modèle | - | ＜1μg/réaction |
| ddH₂O | À 50 | - |
Remarque : a : Si elle est utilisée pour la qPCR/qRT-PCR, la sonde fluorescente doit être ajoutée au système réactionnel.Habituellement, une concentration finale d’amorce de 0,2 µM peut donner de bons résultats ;lorsque les performances de la réaction sont médiocres, la concentration de l'amorce peut être ajustée dans la plage de 0,2 à 1 µM.Habituellement, la concentration de la sonde est optimisée dans la plage de 0,1 à 0,3 μM.Des expériences de gradient de concentration peuvent être réalisées pour trouver la meilleure combinaison d’amorce et de sonde.
Remarques
1.La température de réaction optimale de l'enzyme TS-UNG est relativement basse et peut être optimisée dans la plage de 20 ℃ ~ 37 ℃, le dosage de l'enzyme et le temps de réaction peuvent être optimisés dans la plage de 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 minutes;et l'enzyme peut être inactivée lors du processus de transcription inverse.
2.Il convient à la PCR et à la RT-PCR pour éviter toute contamination.
3.Évitez les gels-dégels fréquents et ne les exposez pas à de grandes fluctuations de température.
4.Différents gènes à amplifier ont une efficacité d'utilisation différente du dUTP et une sensibilité à l'enzyme UNG. Par conséquent, si l'utilisation du système UNG entraîne une diminution de la sensibilité de détection, le système de réaction doit être ajusté et optimisé. Si vous avez besoin d'une assistance technique, veuillez contacter notre compagnie.
