Qualité Ultra Nuclease GMP
Numéro de catalogue : HC2016A
UltraNuclease GMP-grade est exprimé et purifié dans Escherichia coli (E.coli) par génie génétique et préparé dans des environnements GMP.Il peut réduire la viscosité du surnageant cellulaire et du lysat cellulaire dans la recherche scientifique, augmenter l'efficacité de la purification des protéines et améliorer la recherche fonctionnelle des protéines.Le produit peut également réduire les résidus d'acide nucléique de l'hôte au niveau pg, améliorant ainsi les performances et la sécurité des produits biologiques pour des applications telles que la purification de virus, la fabrication de vaccins et la fabrication pharmaceutique de protéines/polysaccharides.En outre, le produit peut également être appliqué pour prévenir l’agglutination des cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMC) dans le cadre de la thérapie cellulaire et du développement de vaccins.
UltraNuclease se présente sous la forme d'un réactif stérilisé, élué dans un tampon (Tris-HCL 20 mM pH 8,0, MgCl 2 mM, NaCl 20 mM, glycérine 50 %), ayant l'aspect d'un liquide incolore et transparent.Ce produit est fabriqué selon les exigences du processus GMP et fourni sous forme liquide.
Composants
UltraNuclease de qualité GMP (250 U/μL)
Conditions de stockage
Le produit est expédié avec de la neige carbonique et peut être stocké entre -25℃~-15°C pendant deux ans.
Si le produit est ouvert et a été conservé à 4℃ pendant plus d'une semaine, nous vous recommandons de filtrerle produit pour éviter toute contamination microbienne.
Caractéristiques
| Hôte d'expression | E. coli recombinant avec le gène UltraNuclease |
| Masse moléculaire | 26,5 kDa |
| point soélectrique | 6,85 |
| Pureté | ≥99 % (SDS-PAGE) |
| Tampon de stockage | Tris-HCL 20 mM pH 8,0, MgCl 2 mM, NaCl 20 mM, 50 % de glycérine |
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Définition de l'unité | La définition d'une unité d'activité (U) est la quantité d'enzyme utilisée pourmodifier la valeur d'absorption de ΔA260 de 1,0 en 30 minutes dans un 2, 625 mlsystème de réaction à 37℃ avec un pH de 8,0 (équivalent à une digestion complète de37 µg d'ADN de sperme de saumon en oligonucléotides). |
Instructions
1. Échantillon Collection
Cellules adhérentes : retirer le milieu, laver les cellules avec du PBS et retirer le surnageant.
Cellules en suspension : recueillir les cellules par centrifugation, laver les cellules avec du PBS, centrifuger à 6 000tr/min pendant 10 min, récupérer le pellet.
Escherichia coli : récolter les bactéries par centrifugation, laver une fois au PBS, centrifuger à 8 000tr/min pendant 5 min et récupérer le pellet.
2. Exemple de traitement
Traitez les culots cellulaires collectés avec un tampon de lyse dans le rapport masse (g)/volume (mL) 1 : (10-20), ou par des méthodes mécaniques ou chimiques sur de la glace ou à température ambiante (1 g de culot cellulaire contient environ
109 cellules).
3. Traitement enzymatique
Ajouter 1 à 5 mM de MgCl au système réactionnel et ajuster le pH à 8-9.
Ajouter UltraNuclease selon le ratio de 250 unités pour digérer 1 g de culots cellulaires, incuber à 37℃ pendant plus de 30 minutes.Veuillez vous référer au formulaire « Temps de réaction recommandé » pour choisir ledurée du traitement.
4. Surnageant Collection
Centrifuger à 12 000 tr/min pendant 30 minutes et récupérer le surnageant.
Remarque : Si la solution est acide ou alcaline, ou contient de fortes concentrations de sel, de détergents oudénaturants, veuillez augmenter le dosage d’enzymes ou prolonger la durée du traitement en conséquence.
Conditions de réaction recommandéesons
| Paramètre | État optimal | État efficace |
| Mg²+Concentration | 1-5 mM | 1-10 mM |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Température | 37 ℃ | 0-42 ℃ |
| Concentration DTT | 0-100 mM | >0 mM |
| Concentration de mercaptoéthanol | 0-100 mM | >0 mM |
| Concentration en cations monovalents | 0-20 mM | 0-150 mM |
| Concentration de phosphate | 0-10 mM | 0-100 mM |
Recommandé Réaction Temps (37 ℃, 2 mM Mg²+, pH 8.0)
| Quantité d'UltraNuclease (concentration finale) | Temps de réaction |
| 0,25 U/ml | >10 heures |
| 2,5 UI/ml | >4h |
| 25 UI/ml | 30 minutes |
Remarques:
Veuillez porter les EPI nécessaires, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour assurer votre santé et votre sécurité !
