Ultra Nucléase
UltraNuclease est un endonucléase génétiquement modifié dérivé de Serratia marcescens, capable de dégrader l'ADN ou l'ARN, double ou simple brin, linéaire ou circulaire dans une large gamme de conditions, de dégrader complètement les acides nucléiques en oligonucléotides 5'-monophosphate d'une longueur de 3 à 5 bases. .Après modification par génie génétique, le produit a été fermenté, exprimé et purifié dans Escherichia coli (E. coli), ce qui réduit la viscosité du surnageant cellulaire et du lysat cellulaire dans la recherche scientifique, mais améliore également l'efficacité de la purification et la recherche fonctionnelle des protéines.Il peut également être utilisé dans la thérapie génique, la purification des virus, la production de vaccins, l'industrie pharmaceutique des protéines et des polysaccharides comme réactif d'élimination des acides nucléiques des résidus hôtes.
Caractéristiques du produit
| N ° CAS. | 9025-65-4 |
| N° CE | |
| Masse moléculaire | 30 kDa |
| Point isoelectrique | 6,85 |
| Pureté des protéines | ≥99 % (SDS-PAGE et SEC-HPLC) |
| Activité spécifique | ≥1.1×106U/mg |
| Température optimale | 37°C |
| pH optimal | 8.0 |
| Activité de protéase | négatif |
| Biocharge | <10UFC/100 000U |
| Protéine résiduelle de la cellule hôte | ≤10 ppm |
| Heavy métal | ≤10 ppm |
| Endotoxine bactérienne | <0,25UE/1000U |
| Tampon de stockage | Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, MgCl2 2 mM, 20 mM NaCl, 50% Glycérol |
Conditions de stockage
Transport ≤0°C；-25~-15°C Stockage，2 ans de validité (éviter le gel-dégel).
Définition de l'unité
La quantité d'enzyme utilisée pour modifier la valeur d'absorption du △A260 de 1,0 en 30 minutes à 37 °C, pH 8,0, équivalente à 37 µg d'ADN de sperme de saumon digéré par découpage en oligonucléotides, a été définie comme une unité active (U).
Contrôle de qualité
Protéine résiduelle de la cellule hôte: kit ELISA
•Protéase Résidus: 250 KU/mL d'UltraNuclease a réagi avec le substrat pendant 60 min, aucune activité n'a été détectée.
•Endotoxine bactérienne: LAL-Test, Pharmacopée de la République populaire de Chine Volume 4 (édition 2020) méthode de test de limite de gel.Règles générales (1143).
•Biocharge : Pharmacopée de la République populaire de Chine Volume 4 (édition 2020) — Général
Règles pour le test de stérilité (1101), norme nationale de la RPC, GB 4789.2-2016.
•Heavy métal:ICP-AES, HJ776-2015.
Opération
L'activité d'UltraNuclease était significativement inhibée lorsque la concentration de SDS était supérieure à 0,1 % ou d'EDTA.
la concentration était supérieure à 1 mM. Les surfactants Triton X-100, Tween 20 et Tween 80 n'ont eu aucun effet sur la nucléase.
propriétés lorsque la concentration était inférieure à 1,5 %.
| Opération | Fonctionnement optimal | Opération valide |
| Température | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| TNT | 0-100 mM | >100 mm |
| 2-mercaptoéthanol | 0-100 mM | >100 mm |
| Ion métallique monovalent （Na+, K+ etc.） | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Utilisation et posologie
• Supprimer l'acide nucléique exogène des produits vaccinaux, réduire le risque de toxicité résiduelle des acides nucléiques et améliorer la sécurité des produits.
• Réduisez la viscosité du liquide alimentaire causée par l'acide nucléique, raccourcissez le temps de traitement et augmentez le rendement en protéines.
• Retirer l'acide nucléique qui enveloppe la particule (virus, corps d'inclusion, etc.), ce qui est propice
à la libération et à la purification de la particule.
| Type expérimental | Production de protéines | Virus, vaccin | Médicaments cellulaires |
| Nombre de cellules | 1 g de poids humide de cellule (remis en suspension avec un tampon de 10 ml) | 1L fermenté surnageant liquide | Culture 1L |
| Posologie minimale | 250U | 100U | 100U |
| Dosage recommandé | 2500U | 25000U | 5000U |
• Le traitement par nucléase peut améliorer la résolution et la récupération de l'échantillon pour la chromatographie sur colonne, l'électrophorèse et l'analyse par transfert.
• En thérapie génique, l'acide nucléique est éliminé pour obtenir des virus adéno-associés purifiés.
