Warm Start Bst 2.0 ADN polymérase (sans glycérol)
L'ADN polymérase V2 de Bst est dérivée de l'ADN polymérase I de Bacillus stearothermophilus, qui a une activité ADN polymérase 5′ → 3 ′ et une forte activité de remplacement de chaîne, mais aucune activité exonucléase 5′ → 3 ′.La Bst DNA Polymerase V2 convient parfaitement au déplacement de brin, à l'amplification isotherme LAMP (amplification isotherme médiée par boucle) et au séquençage rapide.La Bst ADN polymérase V2 est une version à démarrage à chaud basée sur la Bst ADN polymérase V2 (HC5005A) obtenue par une technologie de modification réversible, qui peut inhiber l'activité de l'ADN polymérase à température ambiante, de sorte que le système de réaction peut être utilisé et formulé à température ambiante pour empêcher non -Amplification spécifique et amélioration de l'efficacité de la réaction, et cette version peut être lyophilisée.De plus, son activité est libérée à des températures élevées, il n’est donc pas nécessaire de procéder à une étape d’activation distincte.
Composants
| Composant | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst ADN polymérase V2 (sans glycérol)(8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| Tampon 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Applications
1.Amplification isotherme LAMP
2.Réaction de déplacement simple brin d'ADN
3.Séquençage de gènes à GC élevée
4.Séquençage de l'ADN au niveau du nanogramme.
Condition de stockage
Transport sous 0°C et stockage entre -25°C~-15°C.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'enzyme qui incorpore 25 nmoles de dNTP dans un matériau insoluble dans l'acide en 30 minutes à 65°C.
Contrôle de qualité
1.Test de pureté des protéines (SDS-PAGE):La pureté de l'ADN polymérase V2 de Bst est ≥99 % déterminée par analyse SDS-PAGE utilisant la détection au bleu de Coomassie.
2.EndonucléaseActivité:L'incubation d'une réaction de 50 μL contenant un minimum de 8 U d'ADN polymérase V2 de Bst avec 1 μg d'ADN λ pendant 16 heures à 37 ℃ n'entraîne aucune dégradation détectable comme déterminé.
3.Activité exonucléase:L'incubation d'une réaction de 50 μL contenant un minimum de 8 U d'ADN polymérase Bst V2 avec 1 μg d'ADN de digestion λ -Hind Ⅲ pendant 16 heures à 37 ℃ n'entraîne aucune dégradation détectable comme déterminé.
4.Activité de Nickase:L'incubation d'une réaction de 50 μL contenant un minimum de 8 U d'ADN polymérase Bst V2 avec 1 μg d'ADN pBR322 pendant 16 heures à 37°C n'entraîne aucune dégradation détectable comme déterminé.
5.Activité RNase:L'incubation d'une réaction de 50 μL contenant un minimum de 8 U d'ADN polymérase V2 de Bst avec 1,6 μg d'ARN MS2 pendant 16 heures à 37 °C n'entraîne aucune dégradation détectable comme déterminé.
6.E. coliADN :120 U d'ADN polymérase Bst V2 sont criblées pour détecter la présence d'ADN génomique d'E. coli en utilisant la qPCR TaqMan avec des amorces spécifiques du locus de l'ARNr 16S d'E. coli.La contamination par l'ADN génomique d'E. coli est ≤ 1 copie.
Réaction de la LAMPE
| Composants | 25µL |
| Tampon 10×HC Bst V2 | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP (10 mM chacun) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Vert (25×)a | 1,0 μL |
| Mélange d'apprêtb | 6 μL |
| Bst ADN polymérase V2 (sans glycérol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Modèle | × µL |
| ddH₂O | Jusqu'à 25 µL |
Remarques:
1) une.SYTOTM 16 Vert (25×) : Selon les besoins expérimentaux, d'autres colorants peuvent être utilisés comme substituts ;
2)b.Mélange d'amorces : obtenu en mélangeant 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB et d'autres volumes.
Réaction et condition
1 × Tampon HC Bst V2, la température d'incubation est comprise entre 60°C et 65°C.
Inactivation thermique
80°C, 20 minutes
