BspQI
BspQI peut être exprimé de manière recombinante dans E. coli, capable de reconnaître des sites spécifiques et produit sous
BspQI, une endonucléase de restriction de restriction IIs, est dérivée d'une souche recombinante d'E. coli qui porte le gène BspQI cloné et modifié de Bacillus sphaericus.Il peut reconnaître des sites spécifiques, et la séquence de reconnaissance et les sites de clivage sont les suivants :
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
caractéristiques du produit
1. Activité élevée, digestion rapide ;
2. Faible activité des étoiles, assurant une coupe précise comme un « scalpel » ;
3. Sans BSA et sans origine animale ;
Sensibilité à la méthylation
Dsuis une méthylation :Pas sensible ;
Dcm méthylation :Pas sensible ;
Méthylation CpG :Pas sensible ;
Conditions de stockage
Le produit doit être expédié ≤ 0℃ ;Conserver à -25 ~ - 15 ℃.
Tampon de stockage
Tris-HCl 20 mM, EDTA 0,1 mM, KCl 500 mM, dithiothréitol 1,0 mM, albumine recombinante 500 µg/ml, Trition X-100 0,1 % et glycérol 50 % (pH 7,0 à 25°C).
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d’enzyme nécessaire pour digérer 1 µg d’ADN de contrôle interne en 1 heure à 50°C dans un volume réactionnel total de 50 µL.
Contrôle de qualité
Test de pureté des protéines (SDS-PAGE) :La pureté de BspQI était ≥95 % déterminée par analyse SDS-PAGE.
RNase :10 U de BspQI avec 1,6 μg d’ARN MS2 pendant 4 heures à 50 ℃ ne produit aucune dégradation, comme déterminé par électrophorèse sur gel d’agarose.
Activité DNase non spécifique :10U de BspQI avec 1 μg d'ADN λ à 50 ℃ pendant 16 heures, contre 50 ℃ pendant 1 heure, ne produit aucun excès d'ADN, comme déterminé par électrophorèse sur gel d'agarose.
Ligature et recoupe :Après digestion de 1 µg d’ADN λ avec 10U de BspQI, les fragments d’ADN peuvent être ligaturés avec l’ADN ligase T4 à 16 ºC.Et ces fragments ligaturés peuvent être recoupés avec BspQI.
E. coli ADN : La détection par qPCR TaqMan spécifique de l'ADNr d'E. coli 16s a montré que le résidu du génome d'E. coli ≤ 0,1 pg/ul.
Résidu de protéine hôte :≤ 50 ppm
Bactérien Endotoxine: Test LAL, selon la Pharmacopée chinoise IV édition 2020, méthode de test de limite de gel, règle générale (1143).La teneur en endotoxines bactériennes doit être ≤ 10 UE/mg.
Système et conditions de réaction
| Composant | Volume |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| ADN | 1 μg |
| 10 x tampon BspQ I | 5 µL |
| jj H2O | Jusqu'à 50 µL |
Conditions de réaction : 50 ℃, 1 ~ 16 heures.
Inactivation thermique : 80°C pendant 20 min.
Le système et les conditions de réaction recommandés peuvent fournir un effet de digestion enzymatique relativement bon, à titre de référence uniquement, veuillez vous référer aux résultats expérimentaux pour plus de détails.
Application du produit
Digestion par endonucléase de restriction, clonage rapide.
Remarques
1. Le volume d'enzyme ≤ 1/10 du volume de réaction.
2. L'activité des étoiles peut se produire lorsque la concentration de glycérol est supérieure à 5 %.
3. Une activité de clivage peut se produire lorsque le substrat est inférieur au rapport recommandé.
