Prémélange de sonde multiplex qPCR
Numéro de catalogue : HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) est une pré-solution pour l'amplification PCR quantitative en temps réel 2 × caractérisée par une sensibilité et une spécificité élevées, de couleur bleue et ayant pour effet d'ajouter des échantillons.Ce produit est un réactif pré-mélangé 2× Mix qui permet jusqu'à quatre réactions PCR quantitatives fluorescentes dans un seul puits de réaction.Ce produit contient la méthode des anticorps génétiquement modifiés pour démarrer à chaud l'enzyme Taq, améliorant considérablement la sensibilité et la spécificité de l'amplification.Dans le même temps, ce produit a profondément optimisé le tampon multi-réaction, ce qui peut améliorer l'efficacité d'amplification de la réaction et favoriser l'amplification efficace des modèles à faible concentration.Ce produit peut être utilisé pour le génotypage et l’analyse quantitative multiplex.
spécification
| Démarrage à chaud | Démarrage à chaud intégré |
| Méthode de détection | Détection amorce-sonde |
| Méthode PCR | qPCR |
| Polymérase | Taq ADN polymérase |
| Type d'échantillon | ADN |
Conditions de stockage
Le produit est expédié avec de la neige carbonique et peut être stocké à -25~-15℃ pendant 2 ans.
Instructions
1. RéactionSystème
| Composants | Volume (μL) | Concentration finale |
| 2 × Master Mix qPCR multiplex TaqMan | 12,5 | 1× |
| Mélange d'apprêts (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 µmol/L |
| Mélange de sondes (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Teinture de référence Rox | 0,5 | 1× |
| Modèle ADN/ADNc | 1-10 | - |
| ddH2O | jusqu'à 25 | - |
Remarques:Bien mélanger avant utilisation pour éviter les bulles excessives dues à une agitation vigoureuse.
un.Concentration d'amorces : Primer Mix contient plusieurs paires d'amorces, généralement chaque amorce à une concentration finale de 0,2 μmol/L et peut également être ajustée entre 0,1 et 0,5 μmol/L, selon le cas.
b.Concentration de la sonde : Probe Mix contient plusieurs sondes avec différents signaux de fluorescence, et la concentration de chaque sonde peut être ajustée entre 50 et 250 nmol/L selon la situation spécifique.
1.Référence du colorant Rox : il est utilisé sur les instruments d'amplification PCR en temps réel tels que Applied Biosystems pour corriger l'erreur du signal de fluorescence généré entre les puits ;ce produit ne contient pas de référence de colorant Rox.Le Cas#10200 est recommandé si nécessaire.
2.Dilution du modèle : la qPCR est très sensible et il est recommandé de diluer le modèle pour l'utiliser.Si le modèle est une solution mère d’ADNc, le volume du modèle ne doit pas dépasser 1/10 du volume total.
3.Système de réaction : 25 μL, 30 μL ou 50 μL sont recommandés pour garantir l’efficacité et la répétabilité de l’amplification du gène cible.
4.Préparation du système : veuillez préparer sur le banc super propre et utiliser les pointes et les tubes de réaction sans résidus de nucléase ;il est recommandé d'utiliser les embouts avec des cartouches filtrantes.Évitez la contamination croisée et la contamination par aérosol.
2.Programme de réaction
| Étape du cycle | Température. | Temps | Cycles |
| Dénaturation initiale | 95 ℃ | 5 minutes | 1 |
| Dénaturation | 95 ℃ | 15 secondes | 45 |
| Recuit/Extension | 60 ℃ | 30 secondes |
Remarques:
1.Recuit/Extension : La température et le temps peuvent être ajustés de manière appropriée en fonction de la valeur Tm de l'amorce conçue.
2.Acquisition du signal de fluorescence : le temps d'acquisition du signal de fluorescence requis pour les différents instruments de détection qPCR est différent, veuillez le définir en fonction de la limite de temps minimale.L'heure de plusieurs instruments courants est réglée comme suit :
20 secondes : Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 s : Biosystèmes appliqués 7300
32 secondes : Biosystèmes appliqués 7500
Remarques
Veuillez porter les EPI nécessaires, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour assurer votre santé et votre sécurité !
