Prémélange universel SYBR GREEN qPCR (bleu)

Numéro de catalogue : HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) est une pré-solution pour l'amplification PCR quantitative en temps réel 2 × caractérisée par une sensibilité et une spécificité élevées, est de couleur bleue et a pour effet de tracer l'ajout d'échantillons.Le composant principal, l'ADN polymérase Taq, utilise le démarrage à chaud d'anticorps pour inhiber efficacement l'amplification non spécifique due à l'hybridation des amorces pendant la préparation des échantillons.En même temps, la formule ajoute les facteurs favorisants pour améliorer l'efficacité de l'amplification de la réaction PCR et égaliser l'amplification des gènes avec différentes teneurs en GC (30 ~ 70 %), de sorte que la PCR quantitative puisse obtenir une bonne relation linéaire dans une large gamme quantitative. région.Ce produit contient un colorant de référence passif ROX spécial, applicable à la plupart des instruments qPCR.Il n'est pas nécessaire d'ajuster la concentration de ROX sur différents instruments.Il suffit d’ajouter des amorces et des matrices pour préparer le système réactionnel à l’amplification.

Composants

Mélange maître qPCR bleu universel

Conditions de stockage

Le produit est expédié avec des blocs de glace et peut être stocké entre -25 ℃ et -15 ℃ pendant 18 mois.Il est nécessaire d’éviter une forte irradiation lumineuse lors du stockage ou de la préparation du système réactionnel.

spécification

Instructions

1. Système de réaction

[Remarque] : Mélangez soigneusement avant utilisation pour éviter les bulles excessives dues à une agitation vigoureuse.

a) Concentration d'amorce : La concentration finale d'amorce est de 0,2 μmol/L et peut également être ajustée entre 0,1 et 1,0 μmol/L selon le cas.

b) Concentration du modèle : si le modèle est une solution mère d'ADNc non diluée, le volume utilisé ne doit pas dépasser 1/10 du volume total de la réaction qPCR.

c) Dilution du modèle : il est recommandé de diluer la solution mère d'ADNc de 5 à 10 fois.La quantité optimale de matrice ajoutée est meilleure lorsque la valeur Ct obtenue par amplification est de 20 à 30 cycles.

d) Système de réaction : Il est recommandé d'utiliser 20 μL ou 50 μL pour garantir l'efficacité et la répétabilité de l'amplification du gène cible.

e) Préparation du système : veuillez préparer sur le banc super propre et utiliser les pointes et les tubes de réaction sans résidus de nucléase ;il est recommandé d'utiliser les embouts avec des cartouches filtrantes.Évitez la contamination croisée et la contamination par aérosol.

2.Programme de réaction

Programme standard

Programme rapide

[Remarque] : Le programme rapide convient à la grande majorité des gènes, et les programmes standard peuvent être essayés pour des gènes individuels à structure secondaire complexe.

a) Température et durée de recuit : veuillez ajuster en fonction de la longueur de l'amorce et du gène cible.

b) Acquisition du signal de fluorescence (★) : Veuillez définir la procédure expérimentale conformément aux exigences du mode d'emploi de l'instrument.

c) Courbe de fusion : Le programme par défaut de l'instrument peut être utilisé normalement.

3. Analyse des résultats 

Un minimum de trois répétitions biologiques était nécessaire pour les expériences quantitatives.Après la réaction, la courbe d'amplification et la courbe de fusion doivent être confirmées.

3.1 Courbe d'amplification :

La courbe d'amplification standard est en forme de S.L'analyse quantitative est plus précise lorsque la valeur Ct est comprise entre 20 et 30. Si la valeur Ct est inférieure à 10, il est nécessaire de diluer le modèle et de refaire le test.Lorsque la valeur Ct est comprise entre 30 et 35, il est nécessaire d'augmenter la concentration du modèle ou le volume du système réactionnel, afin d'améliorer l'efficacité de l'amplification et de garantir la précision de l'analyse des résultats.Lorsque la valeur Ct est supérieure à 35, les résultats du test ne peuvent pas analyser quantitativement l'expression du gène, mais peuvent être utilisés pour une analyse qualitative.

3.2 Courbe de fusion :

Le pic unique de la courbe de fusion indique que la spécificité de la réaction est bonne et qu'une analyse quantitative peut être effectuée ;si la courbe de fusion présente des pics doubles ou multiples, une analyse quantitative ne peut pas être effectuée.La courbe de fusion montre des pics doubles, et il est nécessaire de juger si le pic non cible est un dimère d'amorce ou une amplification non spécifique par électrophorèse sur gel d'agarose d'ADN.S'il s'agit d'un dimère d'amorce, il est recommandé de réduire la concentration d'amorce ou de reconcevoir les amorces à haute efficacité d'amplification.S'il s'agit d'une amplification non spécifique, veuillez augmenter la température d'hybridation ou reconcevoir les amorces avec spécificité.

Remarques

Veuillez porter l'EPI nécessaire, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour garantir votre santé et votre sécurité !

Ce produit est uniquement destiné à la recherche !