Inhibiteur de Rnase
L'inhibiteur de la RNase murine est un inhibiteur de la RNase murine recombinante exprimé et purifié à partir d'E.coli.Il se lie à la RNase A, B ou C dans un rapport 1:1 par liaison non covalente, inhibant ainsi l'activité des trois enzymes et protégeant l'ARN de la dégradation.Cependant, il n'est pas efficace contre la RNase 1, la RNase T1, la S1 Nuclease, la RNase H ou la RNase d'Aspergillus.L’inhibiteur murin de la RNase a été testé par RT-PCR, RT-qPCR et ARNm IVT et était compatible avec diverses transcriptases inverses, ADN polymérases et ARN polymérases commerciales.
Comparé aux inhibiteurs de la RNase humaine, l'inhibiteur de la RNase murine ne contient pas deux cystéines très sensibles à l'oxydation, ce qui provoque l'inactivation de l'inhibiteur.Cela le rend stable à de faibles concentrations de DTT (moins de 1 mM).Cette caractéristique le rend approprié pour une utilisation dans des réactions où des concentrations élevées de DTT sont défavorables à la réaction (par exemple RT-PCR en temps réel).
Aapplication
Ce produit peut être largement utilisé dans toute expérience où l'interférence RNase est possible pour éviter la dégradation de l'ARN, comme :
1.Synthèse du premier brin d'ADNc, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Protège l'ARN de la dégradation lors de la transcription/traduction in vitro (par exemple, système de réplication virale in vitro).
3.Inhibition de l'activité RNase lors de la séparation et de la purification de l'ARN.
Conditions de stockage
Le produit peut être stocké à -25～- 15 ℃, valable 2 ans.
Tampon de stockage
KCl 50 mM, HEPES-KOH 20 mM (pH 7,6, 25 ℃), DTT 8 mM et 50 % de glycérol.
Définition de l'unité
La quantité d'inhibiteur de RNase murine nécessaire pour inhiber de 50 % l'activité de 5 ng de ribonucléase A a été définie comme une unité (U).
Poids moléculaire des protéines
Le poids moléculaire de l'inhibiteur de la RNase murine est de 50 kDa.
Contrôle de qualité
Exonucléase Activité:
40 U d'inhibiteur de RNase murin avec 1 µg d'ADN de digestion λ -Hind III à 37°C pendant 16 heures ne produisent aucune dégradation, comme déterminé par électrophorèse sur gel d'agarose.
Activité endonucléase :
40 U d'inhibiteur de RNase murin avec 1 µg d'ADN λ à 37 °C pendant 16 heures ne produisent aucune dégradation, comme déterminé par électrophorèse sur gel d'agarose.
Entailler Activité:
40 U d'inhibiteur de RNase murin avec 1 µg de pBR322 à 37 °C pendant 16 heures ne produisent aucune dégradation, comme déterminé par électrophorèse sur gel d'agarose.
RNase Activité:
40 U d'inhibiteur de RNase murin avec 1,6 µg d'ARN MS2 pendant 4 h à 37 ℃ ne produit aucune dégradation, comme déterminé par électrophorèse sur gel d'agarose.
E.ADN de coli :
40 U d'inhibiteur de RNase murin sont criblées pour détecter la présence d'ADN génomique d'E. coli en utilisant la qPCR TaqMan avec des amorces spécifiques du locus de l'ARNr 16S d'E. coli.La contamination de l'ADN génomique d'E. coli est ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1. Une oscillation ou une agitation violente entraînera l'inactivation de l'enzyme.
2. La plage de température optimale de cet inhibiteur était de 25 à 55 ℃ et il a été inactivé à 65 ℃ et plus.
3. Les activités de la RNase H, de la RNase 1 et de la RNase T1 n'ont pas été inhibées par l'inhibiteur de la RNase murine.
4. L'inhibition de l'activité de la RNase a été constatée dans une large plage de pH (les pH 5 à 9 étaient tous actifs) et l'activité la plus élevée a été observée à pH 7 à 8.
5.Étant donné que les ribonucléases conservent généralement leur activité dans des conditions dénaturantes, il faut veiller à éviter de dénaturer les molécules d'inhibiteur de RNase qui se sont complexées avec une ribonucléase.Pour éviter la libération de ribonucléase active, les températures supérieures à 50 °C et les concentrations élevées d'urée ou d'autres agents dénaturants doivent être évitées.
