ADN polymérase Hotstart Taq
L'ADN polymérase Hot Start Taq (modification d'anticorps) est une ADN polymérase thermostable à démarrage à chaud de Thermus Aquaticus YT-1, qui possède une activité polymérase 5′ → 3 ′ et une activité endonucléase à volet 5′.L'ADN polymérase Taq à démarrage à chaud est une ADN polymérase Taq modifiée par des anticorps Taq thermolabiles.La modification des anticorps a augmenté la spécificité, la sensibilité et le rendement de la PCR.
Composants
| Composant | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| Tampon Taq 5×HC | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 mL | 5×400 mL |
| ADN polymérase Hot Start Taq (anticorps modifié) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Applications
Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 à 25 ℃), KCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, dithiothréitol 1 mM, 0,5 % de Tween20, 0,5 % d'IGEPALCA-630 et 50 % de glycérol.
Condition de stockage
Transport sous 0°C et stockage entre -25°C~-15°C.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'enzyme qui incorpore 15 nmoles de dNTP dans un matériau insoluble dans l'acide en 30 minutes à 75°C.
Contrôle de qualité
1.EndActivité onucléase:L'incubation de 20 U d'enzyme avec 4 µg d'ADN pUC19 pendant 4 heures à 37 ℃ n'a entraîné aucune dégradation détectable de l'ADN, comme déterminé par électrophorèse sur gel.
2.PCR Lambda de 5 Ko :25 cycles d'amplification PCR de 5 ng d'ADN Lambda avec 1,25 unités d'ADN polymérase Taq en présence de 200 µM de dNTP et de 0,2 µM d'amorces donnent le produit attendu de 5 kb.
3.Activité exonucléase:L'incubation d'une réaction de 50 µl contenant un minimum de 12,5 U d'ADN polymérase Taq avec 10 nmol d'oligonucléotide 5´-FAM pendant 30 minutes à 37°C ne produit aucune dégradation détectable.
4.Activité RNase:L'incubation de 10 µL de réaction contenant 20 U d'enzyme avec 1 µg de transcrits d'ARN pendant 2 heures à 37°C n'a entraîné aucune dégradation détectable de l'ARN, comme déterminé par électrophorèse sur gel.
5.Inactivation thermique :Non.
Système de réaction
| Composants | Volume |
| ADN du modèlea | facultatif |
| Amorce directe 10 μM | 0,5 μL |
| Amorce inverse 10 μM | 0,5 μL |
| Mélange dNTP (10 mM chacun) | 0,5 μL |
| Tampon Taq 5×HC | 5 µL |
| Taq ADN polyméraseb(5U/μL) | 0,125 μL |
| Eau sans nucléases | Jusqu'à 25 µL |
Remarques:
1) une.
| ADN | Montant |
| Génomique | 1 ng-1 μg |
| Plasmide ou viral | 1 pg-1 ng |
2)b.La concentration optimale de Taq ADN polymérase peut varier de 5 à 50 unités/mL (0,1 à 0,5 unités/25 µL de réaction) dans des applications spécialisées.
Protocole de cyclage thermique
RAP
| Étape | Température(°C) | Temps | Cycles |
| Dénaturation initialea | 95 ℃ | 1-3 minutes | - |
| Dénaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cycles |
| Recuitb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Extension | 68 ℃ | 1 Ko/min | |
| Prolongation finale | 68 ℃ | 5 minutes | - |
Remarques:
1) Une dénaturation initiale de 1 min à 95°C est suffisante pour la plupart des amplifications.Pour les modèles difficiles, une dénaturation plus longue de 2 à 3 minutes à 95°C est recommandée.Avec la PCR sur colonie, une dénaturation initiale de 5 minutes à 95°C est recommandée.
2) L'étape de recuit dure généralement de 15 à 60 s.La température de recuit est basée sur la Tm de la paire d'amorces et est généralement comprise entre 45 et 68 ℃.
