Nase A
La ribonucléase A (RNaseA) est un polypeptide simple brin contenant 4 liaisons disulfure d'un poids moléculaire d'environ 13,7 kDa.La RNase A est une endoribonucléase qui dégrade spécifiquement l'ARN simple brin au niveau des résidus C et U.Plus précisément, le clivage reconnaît la liaison phosphodiester formée par le 5′-ribose d'un nucléotide et le groupe phosphate sur le 3′-ribose du nucléotide pyrimidine adjacent, de sorte que les phosphates 2, 3′-cycliques sont hydrolysés en 3′ correspondant. ′nucléosides phosphates (par exemple, pG-pG-pC-pA-pG est clivé par la RNase A pour générer pG-pG-pCp et A-PG).La RNase A est la plus active dans le clivage de l'ARN simple brin.La concentration de travail recommandée est de 1 à 100 μG/mL, compatible avec divers systèmes de réaction.Une faible concentration de sel (NaCl 0-100 mM) peut être utilisée pour couper l'ARN simple brin, l'ARN double brin et les chaînes d'ARN formées par hybridation ARN-ADN.Cependant, à une concentration élevée en sel (≥0,3 M), la RNase A ne clive spécifiquement que l'ARN simple brin.
La RNase A est le plus souvent utilisée pour éliminer l'ARN lors de la préparation de l'ADN plasmidique ou de l'ADN génomique. Le fait que la DNase soit active ou non pendant le processus de préparation peut facilement affecter la réaction.La méthode traditionnelle d’ébullition au bain-marie peut être utilisée pour inactiver l’activité de la DNase.Ce produit ne contient ni DNase ni protéase et ne nécessite pas de traitement thermique avant utilisation.De plus, ce produit peut également être utilisé dans des expériences de biologie moléculaire telles que l'analyse de la protection des RNases et l'analyse des séquences d'ARN.
Conditions de stockage
Le produit peut être stocké à -25～-15℃, valable 2 ans.
Instructions
C’est l’une des méthodes courantes de préparation d’une solution de stockage de RNase A.Il peut également être préparé pard'autres méthodes selon les méthodes traditionnelles du laboratoire ou la littérature de référence (telles quese dissolvant directement dans une solution de Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 ou Tris-NaCl)
1. Utilisez 10 mM d’acétate de sodium (pH 5,2) pour préparer 10 mg/mL de solution de stockage de RNase A
2. Chauffage à 100 ℃ pendant 15 min
3. Laisser refroidir à température ambiante, ajouter 1/10 de volume de Tris-HCl 1 M (pH 7,4), ajuster son pH à 7,4 (pourexemple, ajoutez 500 ml de solution de stockage de RNase 10 g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sous-emballé à -20 ℃ pour un stockage congelé, qui peut être stable jusqu'à 2 ans.
[Remarques] : Lors de l'ébullition d'une solution de RNaseA dans des conditions neutres, une précipitation de RNase se formera ;Faites-le bouillir à un pH plus bas, et s'il y a des précipitations, on peut les observer, ce qui peut être causé par la présence d'impuretés protéiques.Si des sédiments sont détectés après l'ébullition, les impuretés peuvent être éliminées par centrifugation à grande vitesse (13 000 tr/min), puis sous-emballées pour un stockage par congélation.
Information produit
| Synonymes | Ribonucléase I;Ribonucléase pancréatique ;Ribonucléase 3'-la pyrimidnooligonucléotidohydrolase;Nase A ;Endoribonulces I |
| N ° CAS. | 9001-99-4 |
| Apparence | Poudre lyophilisée blanche |
| Masse moléculaire | ~ 13,7 kDa (séquence d'acides aminés) |
| PH | 7,6 (plage d'activité 6-10) |
| Température appropriée | 60 ℃ (plage d'activité 15-70 ℃) |
| Agent activateur | Na2+.K+ |
| Inhibiteur | Inhibiteur de Rnase |
| Méthode d'inactivation | Ne peut pas être inactivé par chauffage, il est suggéré d'utiliser une colonne centrifugeuse |
| Origine | Bovine |
| Solubilité | Soluble dans l'eau (10 mg/ml) |
| Perte sur sec | ≤5,0% |
| Activité enzymatique | ≥60 unités Kunitz/mg |
| Point isoelectrique | 9.6 |
Remarques
Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pour l'opération.
