Mélange maître colorimétrique RT-LAMP HCB5204A
Ce produit contient un tampon de réaction, un mélange d'enzymes RT (ADN polymérase Bst et transcriptase inverse résistante à la chaleur), des protecteurs lyophilisés et des composants colorants chromogènes.Pour l'utiliser, utilisez simplement Buffer, l'enzyme de réaction et l'amorce sont mélangées et ajoutées au modèle ;l'ajout d'un protecteur lyophilisé peut être direct.Il a été connecté à un lyophilisateur et lyophilisé, et seules les amorces et les modèles ont été ajoutés lors de leur utilisation.Ce kit permet une détection visuelle rapide et claire de l'amplification, dont la réaction négative est indiquée en rouge et la réaction positive est indiquée par un changement en jaune.
Composant
| Composant | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Tampon d'amplification médié par la boucle (avec colorant) | 0,96 mL | 4,80 mL×2 | 9,60 mL×10 |
| Mélange d'enzymes RT | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 mL×10 |
| Protecteur lyophilisé | 0,96 mL×2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL×20 |
Applications
Pour l'amplification isotherme d'ADN ou d'ARN.
Conditions de stockage
Transporté avec de la neige carbonique, stocké à -25~ -15℃.Évitez les gels-dégels fréquents, le produit est valable 12 mois.
Protocole
1.Décongeler le tampon de réaction à utiliser à température ambiante.Vortexer brièvement ou retourner les tubes plusieurs fois pour bien mélanger, puis centrifuger pour recueillir le liquide au fond du tube.
2.Préparation du système réactionnel.Ce réactif peut être préparé dans deux systèmes réactionnels, un mélange réactionnel liquide et un mélange système lyophilisé.
1) Préparer le mélange réactionnel liquide
| Composant | Volume |
| Tampon d'amplification médié par la boucle (avec colorant) | 10 μL |
| Mélange d'enzymes RT | 2,8 μL |
| 10 × mélange d'apprêta | 5 µL |
| Modèles ADN/ARN b | × µL |
| Eau sans nucléases | Jusqu'à 50 µL |
2) Mélange de système de lyophilisation
① Préparer le mélange lyophilisé
| Composant | Volume |
| Tampon d'amplification médié par la boucle (avec colorant) | 10 μL |
| Protecteur lyophilisé | 20 μL |
| Mélange d'enzymes RT | 2,8 μL |
| Eau sans nucléases | Jusqu'à 50 µL |
② Lyophilisation : Le mélange préparé a été lyophilisé dans un système de 50 μL
③ Préparer le mélange réactionnel
| Composant | Volume |
| Mélange lyophilisé | 1 pièce |
| 10 × mélange d'apprêta | 5 µL |
| Modèles ADN/ARN b | × µL |
| Eau sans nucléases | Jusqu'à 50 µL |
Remarques:
1) une.10×Primer Mix : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM boucle F/B ;
2)b.Le DEPC (soluble dans l’eau) est recommandé pour les modèles d’acide nucléique.
1.Incuber à 65 °C pendant 30 à 45 minutes, durée qui peut être prolongée de manière appropriée en fonction du changement de couleur. Temps de réaction.
2.À l’œil nu, le jaune était positif et le rouge était négatif.
Remarques
1.Du sel peut apparaître au fond du tube tampon, vortexer brièvement ou retourner les tubes plusieurs fois pour bien mélanger à température ambiante.
2.La température de réaction peut être optimisée entre 62 ℃ et 68 ℃ selon l'état des amorces.
3.Les réactifs emballés ne doivent pas être exposés à l'air pendant une longue période.
4.La réaction de décoloration rouge et jaune dépend du changement de pH du système de réaction, veuillez ne pas utiliser la solution de stockage d'acide nucléique Tris contenant, il est recommandé d'utiliser ddH2O acide nucléique stocké ;
5.L'expérience doit être standardisée, y compris la préparation du système réactionnel, la lyophilisation, le traitement des échantillons et le processus d'ajout d'échantillons ;
6.Pour éviter toute contamination, il est recommandé de préparer le système réactionnel dans un banc ultra-propre, dans d'autres cas. Ajouter des gabarits à la sorbonne de la pièce pour éviter les interférences faussement positives.
