2 × HiF Taq plus Master Mix
Numéro de catalogue : HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (avec colorant) est une solution prémélangée 2 × prête à l'emploi contenant de l'ADN polymérase Plus HIF, des dNTP et un tampon optimisé.Deux anticorps monoclonaux à température ambiante qui inhibent l'activité polymérase et l'activité 3′→5′exonucléase sont ajoutés au master mix pour une PCR Hot Start simple et hautement spécifique.Le facteur d'extension est ajouté au master mix pour donner à l'enzyme une capacité d'amplification de fragments longs, la longueur de l'amplification peut aller jusqu'à 13 kb, l'enzyme a une activité ADN polymérase 5′→3′ et une activité 3′→5′ Activité exonucléase, sa fidélité est 83 fois celle de l'ADN polymérase Taq, soit 9 fois celle de l'ADN polymérase ordinaire.Il convient à l'amplification de modèles complexes, le produit d'amplification est une extrémité émoussée.
2 × HIF Taq plus Master Mix (avec colorant) présente les avantages d'une sensibilité rapide et facile, d'une sensibilité élevée, d'une forte spécificité, d'une bonne stabilité, etc., le système de réaction n'a besoin que d'ajouter des amorces et des modèles et peut être amplifié par un double protocole d'étape, simplifiant les étapes expérimentales et gagnant du temps.Ce produit contient des colorants indicateurs d'électrophorèse et les produits PCR peuvent être utilisés directement pour l'électrophorèse.De plus, le produit contient également un agent protecteur spécifique, de sorte que le mélange maître puisse maintenir une activité stable après des gels-dégels répétés.
Conditions de stockage
Les produits doivent être stockés à -25~-15℃ pendant 1 an.
Caractéristiques
| Spécification de produit | Mélange principal |
| Concentration | 2× |
| Démarrage à chaud | Démarrage à chaud intégré |
| Surplomb | Émoussé |
| Vitesse de réaction | Rapide |
| Taille (produit final) | Jusqu'à 13 Ko |
| Conditions de transport | Glace carbonique |
| Type de produit | Prémélanges PCR haute fidélité |
Instructions
1.Système de réaction PCR
| Composants | Volume (μL) |
| Modèle d'ADN | Approprié |
| Amorce directe (10 μmol/L) | 2.5 |
| Amorce inverse (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2 × HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | à 50 |
2.Utilisation recommandée de différents modèles
| Type de modèle | Amplifiez des fragments de 1 Ko à 10 Ko |
| ADN génomique | 50ng-200ng |
| Plasmide ou ADN viral | 10pg-20ng |
| ADNc | 1-2,5 µL (Ne pas dépasser 10 % du volume final de la réaction PCR) |
3.Protocole d'amplification
1) Protocole en deux étapes (modèle de complexité)
| Étape du cycle | Temp. | Temps | Cycles |
| Dénaturation initiale | 98℃ | 3 minutes | 1 |
| Dénaturation | 98℃ | 10 secondes | 30-35 |
| Extension | 68 ℃ | 30 secondes/ko | |
| Prolongation définitive | 72 ℃ | 5 minutes | 1 |
2) Protocole en trois étapes (protocole régulier)
| Étape du cycle | Temp. | Temps | Cycles |
| Dénaturation initiale | 98℃ | 3 minutes | 1 |
| Dénaturation | 98℃ | 10 secondes | 30-35 |
| Recuit | 60 ℃ | 20 secondes | |
| Extension | 72 ℃ | 30 secondes/ko | |
| Prolongation définitive | 72 ℃ | 5 minutes | 1 |
3) Protocole de gradient de recuit (modèle de complexité)
| Étape du cycle | Température | Temps | Cycles |
| Dénaturation initiale | 98℃ | 3 minutes | 1 |
| Dénaturation | 98℃ | 10 secondes | 15 (1 ℃ de réduction par cycle) |
| Recuit de gradient | 70-55℃ | 20 secondes | |
| Extension | 72 ℃ | 30 secondes/ko | |
| Dénaturation | 98℃ | 10 secondes |
20 |
| Recuit | 55 ℃ | 20 secondes | |
| Extension | 72 ℃ | 30 secondes/ko | |
| Prolongation définitive | 72 ℃ | 5 minutes | 1 |
Caractéristiques sous différents protocoles d'amplification
| Protocolel | Deux étapes | En trois étapes | Recuit de gradient |
| Spéc. | rapide | moyen | lent |
| Spécificité | haut | moyen | haut |
| Rendement PCR | moyen | haut | moyen |
| Le taux de détection | haut | moyen | haut |
Remarques
Veuillez porter l'EPI nécessaire, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour assurer votre santé et votre sécurité !
