Inhibiteur de Rnase (sans glycérol)
L'inhibiteur de la RNase murine est un inhibiteur de la RNase murine recombinante exprimé et purifié à partir d'E.coli.Il se lie à la RNase A, B ou C dans un rapport 1:1 par liaison non covalente, inhibant ainsi l'activité des trois enzymes et protégeant l'ARN de la dégradation.Cependant, il n'est pas efficace contre la RNase 1, la RNase T1, la S1 Nuclease, la RNase H ou la RNase d'Aspergillus.L’inhibiteur murin de la RNase a été testé par RT-PCR, RT-qPCR et ARNm IVT et était compatible avec diverses transcriptases inverses, ADN polymérases et ARN polymérases commerciales.
Comparé aux inhibiteurs de la RNase humaine, l'inhibiteur de la RNase murine ne contient pas deux cystéines très sensibles à l'oxydation, ce qui provoque l'inactivation de l'inhibiteur.Cela le rend stable à de faibles concentrations de DTT (moins de 1 mM).Cette caractéristique le rend approprié pour une utilisation dans des réactions où des concentrations élevées de DTT sont défavorables à la réaction (par exemple RT-PCR en temps réel).
Aapplication
Ce produit peut être largement utilisé dans toute expérience où l'interférence RNase est possible pour éviter la dégradation de l'ARN, comme :
1.Synthèse d'ADNc du premier brin, RT-PCR, RT-qPCR, etc. ;
2. Protéger l'ARN de la dégradation lors de la transcription/traduction in vitro (par exemple, réplication virale in vitro) ;
3.Inhibition de l'activité RNase pendant l'isolement et la purification de l'ARN.
Conditions de stockage
Conserver à -25～-15℃ ;
Cycles de gel-dégel ≤ 5 fois ;
Valable 1 ans.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d’inhibiteur de RNase nécessaire pour inhiber de 50 % l’activité de 5 ng de RNase A.
Masse moléculaire
L'inhibiteur de RNase (sans glycérol) est une protéine de 50 kDa.
Contrôle de qualité
Exonucléase Activité:
L'incubation de 40 U d'enzyme avec 1 µg d'ADN de digestion λ-Hind III pendant 16 heures à 37°C n'a entraîné aucune dégradation détectable de l'ADN, comme déterminé par électrophorèse sur gel.
Activité endonucléase :
L'incubation de 40 U d'enzyme avec 1 µg d'ADN X pendant 16 heures à 37°C n'a entraîné aucune dégradation détectable de l'ADN, comme déterminé par électrophorèse sur gel.
Entailler Activité:
L'incubation de 40 U d'enzyme avec 1 µg de pBR322 pendant 16 heures à 37 °C n'a entraîné aucune dégradation détectable de l'ADN, comme déterminé par électrophorèse sur gel.
RNase Activité:
L'incubation de 40 U d'enzyme avec 1,6 µg d'ARN MS2 pendant 4 heures à 37 ℃ n'a entraîné aucune dégradation détectable de l'ARN, comme déterminé par électrophorèse sur gel.
E.ADN de coli :
40 U d'enzyme sont détectées par TaqMan qPCR.L'ADN d'E. coli est ≤ 0, 1pg/40U.
Notes
1. Ne pas secouer ou remuer violemment pour éviter l'inactivation des enzymes.
2. L'inhibiteur de la RNase est actif à des températures allant de 25 ℃ à 55 ℃ et est inactivé à ≥ 65 ℃.
3. L'activité de la RNase H, de la RNase 1 et de la RNase T1 n'est pas inhibée.
4. La plage de pH pour inhiber l'activité de la RNase est large (active à pH 5-9), présentant une activité maximale à pH 7-8.
