ADN polymérase Taq sauvage
L'ADN polymérase Taq est une ADN polymérase thermostable de Thermus Aquaticus YT-1, qui possède une activité polymérase 5′ → 3 ′ et une activité endonucléase à volet 5′.
Composants
| Composant | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Tampon Taq | 2×1 mL | 2×10 ml | 2×50 mL | 5×200 mL |
| ADN polymérase Taq (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Condition de stockage
Transport sous 0°C et stockage entre -25°C~-15°C.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'enzyme qui incorpore 15 nmoles de dNTP dans un matériau insoluble dans l'acide en 30 minutes à 75°C.
Contrôle de qualité
1.Test de pureté des protéines (SDS-PAGE):La pureté de l'ADN polymérase Taq était ≥95 % déterminée par analyse SDS-PAGE.
2.EndActivité onucléase:Un minimum de 5 U d'ADN polymérase Taq avec 1 µg d'ADN λ pendant 16 heures à 37 ℃ n'entraîne aucune dégradation détectable, comme déterminé.
3.Activité exonucléase:Un minimum de 5 U d'ADN polymérase Taq avec 1 µg d'ADN de digestion λ -Hind Ⅲ pendant 16 heures à 37 ℃ n'entraîne aucune dégradation détectable, comme déterminé.
4.Activité de Nickase:Un minimum de 5 U d'ADN polymérase Taq avec 1 µg d'ADN pBR322 pendant 16 heures à 37 °C n'entraîne aucune dégradation détectable, comme déterminé.
5.Activité RNase:Un minimum de 5 U d'ADN polymérase Taq avec 1,6 µg d'ARN MS2 pendant 16 heures à 37 °C n'entraîne aucune dégradation détectable, comme déterminé.
6.E. coliADN :5 U d'ADN polymérase Taq sont criblées pour détecter la présence d'ADN génomique d'E. coli en utilisant la qPCR TaqMan avec des amorces spécifiques du locus de l'ARNr 16S d'E. coli.La contamination par l'ADN génomique d'E. coli est ≤ 1 copie.
7.Amplification PCR (ADN Lambda de 5,0 Ko)- Une réaction de 50 µL contenant 5 ng d'ADN Lambda avec 5 unités d'ADN polymérase Taq pour 25 cycles d'amplification PCR donne le produit attendu de 5,0 kb.
Configuration de la réaction
| Composants | Volume |
| ADN du modèlea | facultatif |
| Amorce directe 10 μM | 1 μL |
| Amorce inverse 10 μM | 1 μL |
| Mélange dNTP (10 mM chacun) | 1 μL |
| Tampon 10×Taq | 5 µL |
| Taq ADN polyméraseb | 0,25 μL |
| Eau sans nucléases | Jusqu'à 50 µL |
Remarques:
1) La concentration réactionnelle optimale des différents modèles est différente.Le tableau suivant montre l’utilisation recommandée du modèle pour un système de réaction de 50 µL.
| ADN | Montant |
| Génomique | 1 ng-1 μg |
| Plasmide ou viral | 1 pg-1 ng |
2) La concentration optimale de Taq ADN polymérase peut varier de 0,25 µL à 1 µL dans les applications spécialisées.
RéactionProgramme
| Étape | Température(°C) | Temps | Cycles |
| Dénaturation initialea | 95 ℃ | 5 minutes | - |
| Dénaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cycles |
| Recuitb | 60 ℃ | 15 s | |
| Extension | 72 ℃ | 1 Ko/min | |
| Prolongation finale | 72 ℃ | 5 minutes | - |
Remarques:
1) La condition de dénaturation initiale convient à la plupart des réactions d’amplification et peut être modifiée en fonction de la complexité de la structure de la matrice.Si la structure du modèle est complexe, le temps de pré-dénaturation peut être prolongé de 5 à 10 minutes pour améliorer l'effet de dénaturation initial.
2) La température de recuit doit être ajustée en fonction de la valeur Tm de l'amorce, qui est généralement réglée à 3 ~ 5 ℃ inférieure à la valeur Tm de l'amorce ;Pour les modèles complexes, il est nécessaire d’ajuster la température de recuit et de prolonger le temps d’extension pour obtenir une amplification efficace.
