Enzymes UDG/UNG
L'UDG (uracile ADN glycosylase) peut catalyser l'hydrolyse de la liaison N-glycosidique entre la base uracile et le squelette sucre-phosphate dans l'ADN double brin et l'ADN double brin.Il peut facilement contrôler la pollution par les aérosols et convient aux systèmes de biologie moléculaire courants tels que la PCR, la qPCR, la RT-qPCR et la LAMP.
Caractéristiques
| Hôte d'expression | E. coli recombinant avec le gène de l'ADN glycosylase de l'uracile |
| Masse moléculaire | 24,8 kDa |
| Pureté | ≥95 % (SDS-PAGE) |
| Inactivation thermique | 95 ℃, 5 ~ 10 minutes |
| Définition de l'unité | Une unité (U) est définie comme la quantité d’enzyme nécessaire pour catalyser l’hydrolyse de 1 µg d’ADNdb contenant du dU en 30 minutes à 25 ℃. |
Stockage
Le produit doit être conservé à -25℃~-15°C pendant deux ans.
Instructions
1.Préparation du mélange réactionnel PCR selon le système suivant
| Composants | Volume (μL) | Concentration finale |
| Tampon 10×PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/lixiviation) | 1 | 0,2 mmol/lixiviation |
| ADN du modèle | X | - |
| Amorce1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 µmol/L |
| Amorce 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 µmol/L |
| ADN polymérase Taq (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| ADN glycosylase d'uracile (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Jusqu'à 50 | - |
Note: Selon les exigences expérimentales, la concentration finale de dUTP peut être ajustée entre 0,2 et 0,6 mmol/L, et 0,2 mmol/L de dTTP peut être ajoutée sélectivement.
2.Procédure d'amplification
| Étape du cycle | Température | Temps | Cycles |
| Dégradation du modèle contenant du dU | 25 ℃ | 10 minutes | 1 |
| Activation UDG, modèle de dénaturation initiale | 95 ℃ | 5~10 minutes | 1 |
| Dénaturation | 95 ℃ | 10 secondes |
30-35 |
| Recuit | 60 ℃ | 20 secondes | |
| Extension | 72 ℃ | 30 secondes/ko | |
| Prolongation définitive | 72 ℃ | 5 minutes | 1 |
Note: Le temps de réaction à 25°C peut être ajusté dans un délai de 5 à 10 minutes selon les exigences expérimentales.
Remarques
1.L'UDG est actif dans la plupart des tampons de réaction PCR.
2.Les enzymes doivent être conservées dans une glacière ou dans un bain de glace lorsqu'elles sont utilisées, et doivent être conservées à -20°C immédiatement après utilisation.
3.Veuillez porter les EPI nécessaires, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour assurer votre santé et votre sécurité !
