Kit de génotypage de souris

Numéro de catalogue : HCR2021A

Ce produit est un kit conçu pour l'identification rapide des génotypes de souris, y compris l'extraction brute de l'ADN et le système d'amplification PCR.Le produit peut être utilisé pour l’amplification PCR directement à partir de la queue, de l’oreille, des orteils et d’autres tissus de souris après simple clivage par Lysis Buffer et Proteinase k.Pas de digestion nocturne, d'extraction au phénol-chloroforme ou de purification sur colonne, ce qui est simple et réduit la durée des expériences.Le produit convient à l’amplification de fragments cibles jusqu’à 2 kb et aux réactions PCR multiplex avec jusqu’à 3 paires d’amorces.Le mélange 2 × Mouse Tissue Direct PCR contient de l'ADN polymérase génétiquement modifiée, Mg²⁺, dNTP et un système tampon optimisé pour fournir une efficacité d'amplification élevée et une tolérance aux inhibiteurs, de sorte que les réactions PCR puissent être réalisées en ajoutant une matrice et des amorces et en réhydratant le produit à 1 ×.Le produit PCR amplifié avec ce produit possède une base « A » proéminente à l’extrémité 3’ et peut être utilisé directement pour le clonage TA après purification.

Composants

Conditions de stockage

Les produits doivent être stockés à -25~-15℃ pendant 2 ans.Après décongélation, Lysis Buffer peut être stocké à 2 ~ 8 ℃ pour une utilisation multiple à court terme et bien mélanger lors de l'utilisation.

Application

Ce produit convient à l'analyse knock-out de souris, à la détection transgénique, au génotypage, etc.

Caractéristiques

1.Opération simple : pas besoin d’extraire l’ADN génomique ;

2.Large application : convient pour l'amplification directe de divers tissus de souris.

Instructions

1.Libération d'ADN génomique

1) Préparation du lysat

Le lysat tissulaire est préparé en fonction du nombre d'échantillons de souris à lyser (le lysat tissulaire doit être préparé sur place en fonction du dosage et soigneusement mélangé pour utilisation), et la proportion de réactifs requise pour un seul échantillon est la suivante :

2) Préparation et lyse des échantillons

Utilisation recommandée des mouchoirs

Prélevez une quantité appropriée d'échantillons de tissus de souris dans des tubes à centrifuger propres, ajoutez 200 μL de lysat de tissu frais dans chaque tube à centrifuger, vortexez et agitez, puis incubez à 55 ℃ pendant 30 minutes, puis chauffez à 98 ℃ pendant 3 minutes.

3) Centrifugation

Bien agiter le lysat et centrifuger à 12 000 tr/min pendant 5 minutes.Le surnageant peut être utilisé comme matrice pour l’amplification PCR.Si le modèle est nécessaire pour le stockage, transférez le surnageant dans un autre tube à centrifuger stérile et conservez-le à -20 ℃ pendant 2 semaines.

2.Amplification PCR

Retirez le mélange 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix de -20 ℃ et décongelez-le sur de la glace, mélangez à l'envers et préparez le système de réaction PCR selon le tableau suivant (opérez sur de la glace) :

Note:

a) La quantité ajoutée ne doit pas dépasser 1/10 du système, et si une trop grande quantité est ajoutée, l'amplification PCR peut être inhibée.

Conditions PCR recommandées

Note:

a) Température de recuit : En référence à la valeur Tm de l'amorce, il est recommandé de régler la température de recuit à la valeur Tm la plus petite de l'amorce +3~5℃.

Problèmes courants et solutions

1.Pas de bandes ciblées

1) Produit de lyse excessif.Choisissez la quantité de modèle la plus appropriée, généralement pas plus de 1/10 du système ;

2) Taille d’échantillon trop grande.Diluer le lysat 10 fois puis amplifier ou réduire la taille de l'échantillon et re-lyser ;

3) Les échantillons de tissus ne sont pas frais.Il est recommandé d'utiliser des échantillons de tissus frais ;

4) Mauvaise qualité de l'apprêt.Utilisez l’ADN génomique pour l’amplification afin de vérifier la qualité de l’amorce et d’optimiser la conception de l’amorce.

2.Amplification non spécifique

1) La température de recuit est trop basse et le nombre de cycles est trop élevé.Augmentez la température de recuit et réduisez le nombre de cycles ;

2) La concentration du modèle est trop élevée.Réduisez la quantité de modèle ou diluez le modèle 10 fois après amplification ;

3) Mauvaise spécificité de l’amorce.Optimisez la conception de l’amorce.

Remarques

1.Afin d'éviter toute contamination croisée entre les échantillons, plusieurs outils d'échantillonnage doivent être préparés et la surface des outils peut être nettoyée avec une solution d'hypochlorite de sodium à 2 % ou un nettoyant à base d'acide nucléique après chaque échantillonnage si une utilisation répétée est nécessaire.

2.Il est recommandé d’utiliser des tissus de souris frais et le volume d’échantillonnage ne doit pas être trop important pour éviter d’affecter les résultats de l’amplification.

3.Le tampon de lyse doit éviter les gels-dégels fréquents et peut être stocké à 2 ~ 8 ℃ pour une utilisation multiple à court terme.S'il est stocké à basse température, des précipitations peuvent se produire et doivent être complètement dissoutes avant utilisation.

4.Le PCR Mix doit éviter les gels-dégels fréquents et peut être conservé à 4 ℃ pour une utilisation répétée à court terme.

5.Ce produit est uniquement destiné à la recherche scientifique expérimentale et ne doit pas être utilisé à des fins de diagnostic ou de traitement clinique.